Kit di rilevamento della mutazione genica dell'EGFR 29 umano (PCR in tempo reale) USO PREVISTO Questo kit di analisi viene utilizzato per la qualità in vitro Individuazione di mutazioni comuni negli esoni 18-21 dell'EGFR gene in campioni di pazienti con cancro polmonare non a piccole cellule umane (Per ulteriori informazioni, fare riferimento alla Tabella 1) Il cancro ai polmoni è diventato la principale causa di decessi per cancro nel mondo, minacciando seriamente la salute umana. Tra i pazienti con cancro polmonare, il cancro polmonare non a piccole cellule rappresenta circa il 80%. L'EGFR è attualmente il target molecolare più importante per il trattamento del cancro polmonare non a piccole cellule. La fosforilazione dell'EGFR può promuovere la crescita, la differenziazione, l'invasione, le metastasi, l'antiapoptosi, e promuovere l'angiogenesi tumorale. L'inibitore della tirosina chinasi EGFR (TKI) può bloccare la via di trasduzione del segnale EGFR inibendo l'autofosforilazione dell'EGFR, inibendo così la proliferazione e la differenziazione delle cellule tumorali, promuovendo l'apoptosi delle cellule tumorali, riducendo l'angiogenesi tumorale, ecc., in modo da ottenere il recupero del tumore. Terapia mirata [1]. Un gran numero di studi ha dimostrato che l'efficacia terapeutica di EGFR-TKI è strettamente correlata allo stato delle mutazioni geniche dell'EGFR, e può inibire specificamente la crescita delle cellule tumorali con mutazioni geniche dell'EGFR [2~3]. Il gene EGFR è situato sul braccio corto del cromosoma 7 (7p12), con una lunghezza completa di 200 Kb, costituito da 28 esoni. La regione di mutazione è localizzata principalmente negli esoni 18-21, tra cui i codoni 746-753 sull'esone 19 sono mutazioni mancanti rappresentano circa il 45% delle mutazioni, e la mutazione L858R sull'esone 21 rappresenta circa il 40% al 45% [4]. Le "linee guida NCCN per la diagnosi e il trattamento del tumore polmonare non a piccole cellule" indicano chiaramente che è necessario eseguire il test di mutazione genica EGFR prima del farmaco EGFR-TKI. Questo kit di test viene utilizzato per guidare il farmaco dei farmaci inibitori della tirosina chinasi del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR-TKI), e per fornire una base per la medicina personalizzata per i pazienti con cancro polmonare non a piccole cellule. Questo kit è utilizzato solo per la rilevazione di mutazioni comuni nel gene EGFR in pazienti con carcinoma polmonare non a piccole cellule. I risultati dei test sono solo di riferimento clinico e non devono essere utilizzati come unica base per il trattamento individuale dei pazienti. I medici devono combinare le condizioni del paziente, le indicazioni dei farmaci e i fattori di trattamento, quali la reazione e altri indicatori di test di laboratorio, per valutare in modo esauriente i risultati dei test. PRINCIPIO DI PROVA Questo kit di rilevamento utilizza una soluzione di arricchimento PCR, la tecnologia ARMS (Amplification Refrared Mutation System) e il metodo combinato della sonda Taqman per rilevare L858R, 19del e altre comuni mutazioni EGFR. Arricchendo i siti di mutazione mediante PCR, la risoluzione e la sensibilità della rivelazione sono ulteriormente migliorate. Le sonde TaqMan sono marcate con un fluoroforo reporter FAM e un fluoroforo quencher BHQ2. Quando la sonda è intatta, il segnale fluorescente emesso dal gruppo reporter viene assorbito dal gruppo di spegnimento; Durante l'amplificazione PCR, l'attività di esonucleasi 5'-3' dell'enzima Taq scinde e degrada la sonda, facendo in modo che il gruppo fluorescente reporter e il fluoroforo che si spegne siano separati in modo che il sistema di monitoraggio della fluorescenza possa ricevere il segnale di fluorescenza. La soluzione di arricchimento PCR riduce la sequenza di fondo di tipo selvatico attraverso la digestione con enzimi di restrizione e migliora ulteriormente la risoluzione e la sensibilità del rilevamento. Le caratteristiche del metodo ARMS: Taq DNA polimerasi, che non ha attività esonucleasi 3'-5', può riconoscere specificamente l'estremità 3' del primer. Solo quando l'estremità 3' del primer è completamente appaiata, il frammento nel sito di mutazione può essere amplificato normalmente. Quando l'estremità 3' del primer non è corrispondente, non può essere amplificata efficacemente. Pertanto, usando questo metodo si può amplificare selettivamente la sequenza mutante, e la sonda Taqman è combinata con il prodotto amplificato per identificare la sequenza bersaglio della mutazione. L'area di rivelazione selezionata dalla soluzione di reazione di controllo interno è un segmento relativamente conservativo sull'esone 2 del gene EGFR umano, circa 120 bp, come controllo di qualità per reagenti, qualità del DNA, e l'operazione stessa. Anche se il DNA è degradato, il controllo interno può veramente reagire al sistema. La quantità efficace di DNA nel gene. Il sistema di rivelazione contiene una certa proporzione di dUTP, dNTP e uracil DNA glicosilasi (enzima UDG), questo enzima (chiamato anche uracil-N-glicosilasi o enzima UNG) può interrompere la PCR contenente il prodotto di dUTP, prevenendo così efficacemente la contaminazione PCR.