Kit di rilevamento acido nucleico virus Monkeypox Singclean (PCR a fluorescenza) IVD per Monkeypox

[Uso previsto]

Il kit di rilevamento dell'acido nucleico del virus Monkeypox (PCR a fluorescenza) viene utilizzato per la rilevazione dell'acido nucleico dal virus della monkeypox nel siero e nei campioni di rash pustolare o vescicolare umano provenienti da individui sospetti di infezione da virus della monkeypox. Rilevando specificamente i frammenti di acido nucleico del virus della monkeypox, il virus della monkeypox può essere rapidamente identificato, il che è adatto per una diagnosi rapida di malattie correlate causate da infezione del virus della monkeypox.

[Specifiche di imballaggio]

25 test/scatola, 50 test/scatola

Nota:

I kit con numeri di lotto diversi non sono intercambiabili.

2.tutti i campioni biologici del kit sono stati estinti.

 

[Requisiti campione]

Tipo di campione

Campioni di rash sierico e pustolare o vescicolare umano.

2.prelievo dei campioni

Siero: Utilizzare una siringa sterile per prelevare 2 ml di sangue venoso dei soggetti, iniettarlo in una provetta sterile per il prelievo, lasciarlo a temperatura ambiente per non più di 4 ore, attendere che il campione separi il siero. Oppure centrifugare a 4000 rpm per 5 minuti a temperatura ambiente per separare il siero e trasferirlo in una provetta sterile di ricambio da 1,5 ml raccolta del campione di vescicole e pustole: Selezionare vescicole fresche o pustole sulla pelle, disinfettarle con iodofor, quindi strofinare lo iodofor con alcool al 70%. Dopo aver evaporato completamente l'alcool, utilizzare un ago sterile per forare e strizzare il liquido tissutale, immergere il bastoncino di cotone nel liquido, inserire rapidamente il bastoncino di cotone nella provetta di campionamento da 3-5 ml contenente la soluzione di conservazione, rompere il bastoncino di cotone vicino alla parte superiore. serrare il tappo del tubo e sigillarlo per l'ispezione.

3. Conservazione e spedizione dei campioni

I campioni prelevati devono essere inviati immediatamente per l'analisi. I campioni devono essere analizzati entro 24 ore se conservati a una temperatura compresa tra 2ºC e 8ºC. I campioni che non possono essere analizzati entro 24 ore devono essere conservati a -70 C o a temperature inferiori (in assenza di condizioni di conservazione di 70ºC 25ºC, i campioni possono essere conservati da - 15ºC a - 10 per giorni). Evitare più cicli di congelamento/scongelamento. I campioni devono essere trasportati in una caraffa congelata sigillata con ghiaccio o in una scatola di schiuma sigillata con ghiaccio.

 

[Metodo di prova]

Leggere le istruzioni del kit di analisi prima dell'uso.

Preparazione del reagente (nell'area di preparazione del reagente)

1.1 estrarre i componenti presenti nella scatola e collocarli a temperatura ambiente. Dopo aver equilibrato la temperatura a temperatura ambiente, miscelare bene e centrifugare brevemente per un uso successivo. In base al numero di campioni da analizzare, ai controlli negativi e ai controlli positivi, prelevare la quantità corrispondente di componenti in proporzione (38μL/persona di soluzione di reazione MPV-PCR + 2μL/persona di miscela MPV-enzima) e miscelarli accuratamente per formare una miscela PCR. Liquid-1, che è stato usato dopo centrifugazione istantanea.

1.2 trasferire i reagenti preparati sopra nell'area di trattamento dei campioni per l'uso.

2.elaborazione dei campioni (nell'area di trattamento dei campioni)

2.1 estrazione dei campioni:

Per l'estrazione dei campioni, utilizzare il kit di estrazione degli acidi nucleici.

Il controllo negativo, il controllo positivo e i campioni da analizzare vengono elaborati contemporaneamente.

2.2 aggiungere il campione

Aggiungere 10μL di DNA estratto alle provette PCR nell'ordine seguente: Controllo MPV negativo, controllo MPV positivo e campione da analizzare. Aggiungere 40μL di miscela master MPV in ciascun pozzetto. Ciascun pozzetto è stato tappato, centrifugato a 2000 giri/min per 10 secondi e posto su una macchina PCR fluorescente.

3.amplificazione PCR (nell'area di amplificazione e analisi)

Per le impostazioni, fare riferimento al manuale di istruzioni di ogni strumento.

3.1 collocare le provette di reazione PCR che hanno terminato l'aggiunta di campioni nello strumento PCR a fluorescenza, impostare i fori di test in base alla sequenza corrispondente di aggiunta dei campioni, impostare i fori di test per i prodotti di controllo di qualità positivi, i prodotti di controllo di qualità negativi e i campioni sconosciuti e impostare il nome del campione.

3.2 sistema di reazione totale: 25μL

3.3 selezione del canale di rilevamento della fluorescenza:1) selezionare il canale FAM (Reporter: FAM, quencher: None) per rilevare i geni target del virus monkeypox: 2) selezionare IL canale ESADECIMALE o VIC (Reporter: HEX/VIC, quencher: None); 3) impostare la fluorescenza di riferimento (riferimento passivo) su None (nessuno); impostare il volume campione su 50.

3.4 impostazione dei parametri ciclici:

Nota: Utilizzare lo strumento PCR quantitativo a fluorescenza Rea-Time ABI 7500 e scegliere "Nessuno" in corrispondenza di riferimento passivo e quencher.

Analisi dei risultati

Dopo la reazione, i risultati vengono salvati automaticamente e la linea di base e la soglia di ciascun canale di rilevamento vengono regolate in base alle immagini analizzate. Fare clic su "analisi" per l'analisi per fare in modo che tutti i parametri soddisfino i requisiti del controllo di qualità, quindi controllare i risultati di rilevamento di ciascun campione sconosciuto.

5.controllo di qualità

Prodotti di controllo negativi: La curva FAM non ha valore CT o CT>40; e il rilevamento standard interno del virus monkeypox (HEX/VIC) non ha valore CT o CT>40.

Prodotti di controllo positivi: Curva FAM CS35; e rilevamento standard interno del virus monkeypox (HEX/VIC) positivo, CT≤35.

se i due elementi sopra indicati sono stati rispettati contemporaneamente nella stessa ispezione, altrimenti la seconda ispezione sarà considerata non valida e sarà necessaria una nuova ispezione.
 

[Valore di riferimento positivo]

Attraverso lo studio dei valori di riferimento, è stato determinato che il valore di riferimento di CT del gene bersaglio rilevato da questo kit era 40, e il valore di riferimento di CT dello standard interno era 40.

[Interpretazione dei risultati delle analisi]

1.valore CT di rivelazione FAM ≤ 40, e la rivelazione standard interna è positiva (valore CT ≤ 40), riportata come positiva al virus monkeypox;

2.Nessun valore CT o valore CT > 40 nella rilevazione FAM, e la rilevazione interna del canale standard è positiva (valore CT ≤ 40), e la segnalazione è negativa per il virus monkeypox;

3.se non è presente alcun valore CT o valore CT > 40 nel test standard interno, il risultato del test del campione non è valido. La causa deve essere individuata ed eliminata, il campione deve essere ricampionato e analizzato nuovamente (se il risultato del test ripetuto non è ancora valido, contattare l'azienda).

4.per i campioni positivi, il risultato del test standard interno non è richiesto; per i campioni negativi, il test standard interno deve essere positivo. se il test standard interno è negativo, il risultato del test del campione non è valido. I campioni vengono ricampionati e vengono eseguiti esperimenti ripetuti (se i risultati dei test di esperimenti ripetuti non sono ancora validi, contattare la nostra azienda).

 

[Valore di riferimento positivo]

Attraverso lo studio dei valori di riferimento, è stato determinato che il valore di riferimento di CT del gene bersaglio rilevato da questo kit era 40, e il valore di riferimento di CT dello standard interno era 40.

[Interpretazione dei risultati delle analisi]

1.valore CT di rivelazione FAM ≤ 40, e la rivelazione standard interna è positiva (valore CT ≤ 40), riportata come positiva al virus monkeypox;

2.Nessun valore CT o valore CT > 40 nella rilevazione FAM, e la rilevazione interna del canale standard è positiva (valore CT ≤ 40), e la segnalazione è negativa per il virus monkeypox;

3.se non è presente alcun valore CT o valore CT > 40 nel test standard interno, il risultato del test del campione non è valido. La causa deve essere individuata ed eliminata, il campione deve essere ricampionato e analizzato nuovamente (se il risultato del test ripetuto non è ancora valido, contattare l'azienda).

4.per i campioni positivi, il risultato del test standard interno non è richiesto; per i campioni negativi, il test standard interno deve essere positivo. se il test standard interno è negativo, il risultato del test del campione non è valido. I campioni vengono ricampionati e vengono eseguiti esperimenti ripetuti (se i risultati dei test di esperimenti ripetuti non sono ancora validi, contattare la nostra azienda).